稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）

稀释法用于测定最小抑菌浓度（MIC），这是评估抗菌剂抑制微生物生长能力的重要实验技术。常用的方法包括微量稀释法和肉汤稀释法。琼脂稀释法因其操作简便、成本低廉且适合高通量筛选而受到广泛应用，尤其适合自动化操作和精确控制药物浓度。相比之下，肉汤稀释法直观易操作，适合实验室规模测试，能够根据实验需求灵活调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

1. 原理

本实验采用琼脂稀释法，将不同浓度的抑菌剂溶解在琼脂培养基中，然后通过接种细菌观察其生长情况，以确定抗（抑）菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法适用于不溶性抗（抑）菌产品。

2. 操作步骤

(1) 制备抗（抑）菌溶液：在无菌环境下，将5ml或5g（固体研磨后）样品放入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡混合，制成10%的均匀分散溶液或悬液。
(2) 配制含抗菌剂的培养基：将10%的抗（抑）菌溶液用PBS进行系列稀释，制成不同浓度的受试液，并在45℃～50℃水浴中预热。
(3) 制备双倍浓度的培养基：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中，加热至沸腾并121℃灭菌15分钟，备用。
(4) 配制含抗（抑）菌液的培养基：从系列稀释的抗菌液中取10ml加入平皿，再加入10ml预热的双倍MH琼脂培养基，摇晃均匀后待凝固。
(5) 点种细菌：用加样器取1μl～2μl（种菌量约为107cfu/ml）菌悬液点种于含抗（抑）菌液的平皿中，接种后形成的菌液圈直径约为5mm～8mm（每个点菌量约为104cfu）。
(6) 对照实验：以同样方法接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板作为阳性对照。
(7) 培养观察：将接种后的平板放置于35℃培养箱中，倒置培养18h～24h，并观察结果。

3. 评判标准

若菌落生长被完全抑制的最低抗（抑）菌液浓度即为该样品对受试菌的MIC，单一菌落生长可忽略不计。

肉汤稀释法

1. 原理

本实验将不同浓度的抑菌剂混合溶解于营养肉汤培养基中，通过观察细菌的生长情况，以确定抗（抑）菌剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法适用于可溶性抑菌产品。

2. 操作步骤

(1) 按2112所示方法制备金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液。
(2) 配制抗菌剂培养基：用蒸馏水对抗（抑）菌溶液进行系列稀释，各稀释度取25ml加入含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
(3) 接种：取1ml含菌量约为108cfu/ml的菌悬液接种于含抗（抑）菌剂的肉汤试管中，作为实验组样本。
(4) 设立对照：以相同方法接种不含抗（抑）菌剂的肉汤试管中，作为阳性对照组。
(5) 设置阴性对照组：取2支仅含肉汤的试管。
(6) 培养观察：将实验组、阳性对照组及阴性对照组样本放置于37℃培养箱中培养48小时，观察结果。
(7) 进行活菌计数，试验用菌悬液应保持在5×105cfu/ml至5×106cfu/ml的有效浓度。

3. 评判标准

当阳性对照管有细菌生长（混浊），阴性对照管无菌生长（透明），试验用菌悬液浓度为5×105cfu/ml至5×106cfu/ml时，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗（抑）菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。 在生物医疗领域，使用尊龙凯时(中国区)人生就是搏的产品能够有效帮助科研人员实现更高效的实验操作，加强对抗菌剂的评估和应用，提高疾病防控能力。